在缓冲液中Tris-HCl与HEPES都是应用比较普遍的。为什么把它们两个拿出来对比,这也是为了很好的让大家了解到更多相关信息,以便在采购和使用过程中更准确。
1、Tris-HCl缓冲液
Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围,Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。
1)Tris-HCl缓冲液优点
碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的范围pH缓冲液;对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
2)Tris-HCl缓冲液缺点
pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1
温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4
2、HEPES缓冲液
HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。
1)HEPES缓冲液优点:
在开放式培养或Cells观察时能维持较恒定的pH值,并对Cells伤害性作用。
2)HEPES缓冲液缺点:
在高浓度时对一些Cells可能有毒,与其他缓冲剂相比价格略贵。
Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液的应用
1、Tris-HCl缓冲液
Tris是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的PH。此外,Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用Tris,换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。
2、HEPES缓冲液
HEPES缓冲液对Cells伤害性作用,它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用时浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。它还用于环境,分析和生物学研究;作为阳离子交换层析中的结合缓冲液和洗脱液;作为凝胶电泳中的运行缓冲液等。