化学发光免疫检测中,我们需要用吖啶酯先标记上抗体蛋白,才能在免疫反应后对待测物进行检测,因此如何标记抗体就非常的关键了,吖啶酯类化合物已被广泛证明为非常有用的化学发光标记物,其稳定性、标记特异性和检测灵敏度都超越放射性同位素。
吖啶酯发光标记原理:
在碱性条件下,NHS 作为离去基团被取代,蛋白质与吖啶酯形成稳定的酰胺键。反应完成后,多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在碱性过氧化氢存在下,吖啶标记的蛋白不需要酶催化就可自行发光。
激发液的加入 导致反应体系立即释放约 430 nm 的光子,通过使用标准光度计(luminometer)计数光子数量就可检测蛋白质的浓度。因为此发光过程是十分短暂(整个过程在 2 秒钟内完成),样品必须直接放在光度计内部光 子探测器前面。蛋白质、多肽、抗体、核酸都可以用吖啶酯标记。
吖啶酯发光标记注意事项
吖啶酯有多种类型,常见的各种吖啶酯、吖啶磺酰胺、吖啶磺酸盐等等都属于吖啶酯类化合物。需要注意的是,溶解吖啶琥珀酰亚胺酯时,使用的 DMF 必须严格无水,防止吖啶酯水解.不使用时,干燥密封-20℃保存。
如果是不含-NHS 的吖啶羧酸需要加入缩合剂 EDCI 等,才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。吖啶酰肼含有游离氨基,所以更加适用直接偶联含有醛基的多糖,核酸或者蛋白质等。
吖啶酯发光优势
1.针对传统吖啶酯,在其结构上进行了修饰,增大了位阻,增强了抗水解性,如在室温下,在 pH 为 7.0 的 PB 缓冲液中很稳定。
2.光释放快速集中、发光效率高、发光强度大,易与蛋白质联结且联结后光子产率不减少。
3.发光反应干扰因素少,标记物稳定( 在2 - 8 ℃下可保存数月之久)
德晟科技研发生产的吖啶酯属于自主研发生产,对吖啶酯的研究开发投入了大量精力,所以在质量上的把控更加的严格。目前公司产品已销往全球一百多个国家,99%以上客户都收到好评复购,产品质量优,价格有优惠,有意向了解可以来电咨询,德晟欢迎您的来电。